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高效液相色譜法測定虎杖中大黃素的含量


//www.shxke.icu2016-02-03 09:37:30

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  摘要:虎杖不僅供觀賞,也做食品,嫩莖做蔬菜,根做冷飲料,置涼水中鎮涼(冰箱冰鎮尤佳》名,“冷飲子”,清涼解暑代茶。它的液汁可染米粉,別有風味。食用以其味酸故也稱“酸湯桿”。

  虎杖收載于《中國藥典》2000年版一部,采用分光光度法測定總葸醌控制含量?;⒄群禎嘌萇?,以游離型為主,有大黃素、大黃素甲醚、大黃酚等成分?,本文采用高效液相色譜法測定虎杖藥材中大黃素的含量,方法快速、方便、可靠。

  1儀器與試藥

  Agilent1100型組合式全自動高效液相色譜儀?;⒄紉┎?市售),大黃素對照品(中國藥品生物制品檢定所,供含量測定用),甲醇為色譜純,其它試劑均為分析純。

  2方法和結果

  2.1色譜條件

  色譜柱:KromasilC18(250mm×4.6mm,5μm),流動相:甲醇-0.1%磷酸溶液(85:15),流速:1.0mlmin,柱溫:室溫,測定波長:254nm,用外標法檢測,進樣量:5.OμL。

  2.2供試品溶液的制備

  取本品粉末(過三號篩)約0.5g(同時另取本品粉末在105℃測定干燥失重),精密稱定,置100ml容量瓶中,加甲醇約80ml,超聲處理(功率250W,頻率30kHz)30min,放冷至室溫,加甲醇至刻度,搖勻,濾過,精密量取續濾液10ml,置100ml圓底燒瓶中,揮去甲醇,加2.5mol/L硫酸溶液20ml,加熱回流1h,冷卻,加氯仿30nIl,繼續回流2h,分取氯仿層,酸液用氯仿提取3次,每次5ml,合并氯仿提取液,通過裝有無水硫酸鈉的漏斗,置50ml容量瓶中,濾器用少量氯仿洗滌,洗液并人濾液中,加氯仿至刻度,搖勻,精密量取氯仿液10ml,水浴蒸干,殘渣加甲醇適量使溶解,置25ml容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,作為供試品溶液。

  2.3對照品溶液的制備

  精密稱取大黃素對照品9.81mg,置100ml容量瓶中,加甲醇適量使溶解,并加甲醇至刻度,搖勻,作為對照品儲備液(濃度為0.0981mg/ml)。精密量取lml,加甲醇稀釋至25ml,作為對照品溶液。

  2.4線性關系考察

  將上述大黃素對照品溶液,分別進樣2.0μL、4.0μL、6.0μL、8.0μL、10.0μL、12.0μL。記錄峰面積,以峰面積(Y)對進樣量(X)作圖,得標準曲線,計算回歸方程:Y=4.0387×103X一0.844,r=0.9999,線性范圍為7.848×10-3~4.709×10-2.

  2.5精密度試驗

  取同一供試品溶液,重復進樣6次,記錄峰面積,結果RSD為0.2%,表明精密度良好。

  2.6重復性試驗

  取同一批虎杖樣品5份,按上述方法測定大黃素的含量,結果RSD為0.5%。

  2.7溶液穩定性試驗

  取“2.6”項下供試品溶液,在0,4,8,12,16,20,24h分別進樣5μL,記錄峰面積,結果峰面積的RSD為0.9%,表明供試品溶液在24h內均穩定。

  2.8回收率試驗

  精密稱取已知含量為1.6%樣品適量,分別精密加入大黃素對照品儲備液15ml,按上述方法測定,計算加樣回收率。

  2.9樣品測定

  取虎杖藥材按上述方法測定樣品中大黃素的含量,結果見表2。將對照品溶液、供試品溶液分別進樣sva,依本法測定,樣品和對照品在同一保留時間位置上有一相應的色譜峰。

  3討論

  取大黃素對照品溶液,在200~400nm波長范圍內進行掃描,結果顯示在219nm、254nm、292nm處均有最大吸收峰,由于254nm處的吸收度較強且不受溶劑峰干擾,故選擇254nm作為測定吸收波長,與《中國藥典》規定一致。

  實驗表明,本品經水解后再用氯仿提取4次,大黃素已基本提取完全。

  從線性、回收率、重現性、溶液穩定性等試驗結果可以看出,用HPLC法測定虎杖中大黃素的含量,準確性高,重現性好,且操作簡便快速。

 

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